Sec8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422866

Descripción general

Exoc4 codifica Sec8, una subunidad esencial del complejo exocisto octamérico que media el anclaje de vesículas secretoras a sitios definidos de la membrana plasmática antes de la fusión dependiente de SNARE. En células de ratón, Sec8 ayuda a coordinar la exocitosis polarizada y el tráfico de membranas que sustentan procesos como la polaridad epitelial, el crecimiento de neuritas, la citocinesis y el reciclaje de receptores, integrando señales de pequeñas GTPasas como Ral, Rab y Cdc42. La función del exocisto está estrechamente vinculada a la remodelación del citoesqueleto y a la migración celular dirigida, lo que convierte a Sec8 en un nodo útil para estudiar las vías que regulan la organización tisular y la fidelidad del transporte intracelular. La desregulación del tráfico dependiente del exocisto se ha asociado con alteraciones de la polaridad celular y dinámicas de señalización aberrantes relevantes para la investigación del desarrollo y la neurobiología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sec8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Exoc4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Exoc4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Exoc4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sec8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Exoc4 para la investigación de la señalización de Sec8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Exoc4 críticos para la función de Sec8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Exoc4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sec8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sec8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Exoc4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sec8 (m) y el plásmido HDR Sec8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Exoc4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Exoc4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.