Scrib CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430616

概要

Scrib遺伝子は、細胞―細胞接着部位に局在し、頂端―基底極性、上皮の構築、および方向性のある細胞移動を協調的に制御する、保存性の高い極性スキャフォールドタンパク質であるScribbleをコードします。マウス系では、Scribbleは極性ネットワークからのシグナルを接着結合や細胞骨格の制御因子と統合し、平面内細胞極性、小胞輸送、組織形態形成などの過程に影響を与えます。SCRIB依存的な極性制御の破綻は、増殖や浸潤性の変化と関連しており、この経路が発生異常やがんに関連する表現型と結び付くことが示されています。そのためScribは、接着の完全性、細胞移動、ならびに極性依存的シグナル伝達が組織の構築や疾患機構を規定する文脈で広く研究されています。

Scrib CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScrib遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scrib内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scribのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Scribタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Scribシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scrib欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Scribの機能に不可欠なScribエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scribゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Scrib CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびScrib CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scrib遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Scrib HDRプラスミド（m）および Scrib HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScribホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScrib標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。