SAP 49 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-407057-KO-2

概要

SF3B4 は、スプライシング因子 3B サブユニット 4（SAP 49）をコードしており、pre-mRNA スプライシングの際にブランチポイントおよび 3′ スプライス部位を正確に認識することを促進する SF3b 複合体内の U2 snRNP の中核構成要素です。SAP 49 はスプライソソーム A 複合体および B 複合体の形成と安定化を助けることで、転写産物アイソフォームの選択に影響し、細胞周期の進行、DNA 損傷応答、分化に関連する協調的な遺伝子発現プログラムを支えます。スプライソソームの忠実性が破綻すると、広範な選択的スプライシングの変化やプロテオームの再編成を引き起こし得るため、SF3B4 はヒト細胞における RNA プロセシング・ネットワークを研究する上で有用なノードとなります。SF3B4 の発現変動やスプライソソーム機能不全は、異常スプライシングが細胞ストレス応答や増殖制御の破綻に関与する病的状態と関連づけられています。

SAP 49 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるSF3B4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SF3B4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SF3B4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SAP 49タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SAP 49シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SF3B4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SAP 49の機能に不可欠なSF3B4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SF3B4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SAP 49 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSAP 49 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SF3B4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SAP 49 HDRプラスミド（h）および SAP 49 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSF3B4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSF3B4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。