Plasmide CRISPR/Cas9 KO S-100A16 (m): sc-426783

Présentation

Le gène murin S100a16 code S-100A16, une petite protéine liant le calcium de type « EF-hand » appartenant à la famille S100, qui module la signalisation dépendante du calcium et les interactions protéine–protéine. S-100A16 est associée à la régulation de l’organisation du cytosquelette, à la motilité cellulaire et aux réponses au stress cellulaire, avec des rôles rapportés dans des programmes de différenciation et le remodelage du réseau d’actine. Par ses interactions avec des nœuds de signalisation influençant les processus liés aux MAPK et aux GTPases de la famille Rho, S-100A16 peut affecter la dynamique d’adhérence et les réponses transcriptionnelles. Une expression dérégulée de S100A16 a été associée à un remodelage tissulaire pathologique et à des phénotypes oncogéniques dans divers contextes, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des voies liées à la prolifération, à la migration et à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO S-100A16 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène S100a16 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du S100a16, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert S100a16 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine S-100A16.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en S100a16 pour l'étude de la signalisation de S-100A16, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de S100a16 essentiels à la fonction de S-100A16
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de S100a16 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le S-100A16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le S-100A16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus S100a16. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le S-100A16 plasmide HDR (m) et le S-100A16 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie S100a16 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles S100a16 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.