Plasmide CRISPR/Cas9 KO RXRβ (m): sc-422768

Présentation

Rxrb code le récepteur X des rétinoïdes bêta (RXRβ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui forme des hétérodimères avec de multiples partenaires, notamment les PPAR, les LXR, le FXR, le VDR et les RAR, afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant le métabolisme des lipides et du glucose, la différenciation cellulaire et la signalisation inflammatoire. RXRβ intègre des signaux issus des rétinoïdes et des lipides pour moduler la transcription associée à la chromatine au niveau d’éléments de réponse, influençant la fonction mitochondriale et l’équilibre oxydatif dans les tissus métaboliquement actifs. Dans des modèles murins, une activité altérée de Rxrb a été associée à une dérégulation de l’homéostasie métabolique et à une modulation immunitaire, ce qui le rend pertinent pour l’étude de la stéatose, de la sensibilité à l’insuline et des mécanismes des maladies inflammatoires. Son rôle central dans le dialogue entre récepteurs nucléaires fait également de RXRβ un nœud clé pour disséquer les interactions de voies impliquées dans le développement et la signalisation endocrinienne.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RXRβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rxrb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rxrb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rxrb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RXRβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rxrb pour l'étude de la signalisation de RXRβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rxrb essentiels à la fonction de RXRβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rxrb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RXRβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RXRβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rxrb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RXRβ plasmide HDR (m) et le RXRβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rxrb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rxrb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.