Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405836
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- RIP/Rab CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してRIP/Rabゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: RIP/Rab 抗体 (H-2): sc-166651
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
RIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-405836 | 20 µg | $397.00 |
概要
AGFG1（RIP/Rab）は、FGリピートをもつArfGAPをコードしており、膜輸送をクラスリン依存性エンドサイトーシスおよびエンドソームでのソーティングと結び付けます。RIP/Rabはエンドサイトーシス機構の構成要素と相互作用し、受容体の取り込み、小胞の出芽、カーゴのリサイクリングに寄与することで、GTPアーゼにより制御される膜ダイナミクスと細胞骨格の組織化を連結します。これらの役割を通じて、AGFG1はシグナル伝達のターンオーバーやタンパク質恒常性（プロテオスタシス）の経路に影響を与え、これらは増殖状態やストレス適応状態でしばしば変化します。AGFG1が関与するエンドサイトーシスおよび輸送プログラムの破綻は、がん生物学や宿主—病原体相互作用に関連する状況と関連付けられており、機構解明研究における有用な標的となります。
RIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAGFG1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AGFG1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AGFG1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RIP/Rabタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、RIP/Rabシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AGFG1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- RIP/Rabの機能に不可欠なAGFG1エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、AGFG1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- RIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AGFG1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
RIP/Rab HDRプラスミド（h）および RIP/Rab HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAGFG1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAGFG1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。