Ribosomal Protein S3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402327

Panoramica

RPS3 codifica la proteina ribosomiale S3, un componente centrale della piccola subunità ribosomiale 40S che supporta l’inizio della traduzione, la decodifica e, più in generale, la biogenesi del ribosoma. Oltre al suo ruolo strutturale nella sintesi proteica, RPS3 è stata collegata alle risposte cellulari allo stress e può influenzare reti di segnalazione connesse alla regolazione trascrizionale, all’apoptosi e alle risposte al danno del DNA. Poiché la funzione ribosomiale vincola la proliferazione e l’omeostasi del proteoma, l’alterazione dell’espressione di RPS3 o uno squilibrio ribosomiale vengono spesso esaminati in contesti di crescita oncogenica, segnalazione infiammatoria e stress neurodegenerativo. La perturbazione di RPS3 è quindi utile per analizzare come il controllo della traduzione si interfacci con i percorsi di mantenimento del genoma e della proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein S3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RPS3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RPS3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RPS3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ribosomal Protein S3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RPS3 per lo studio della segnalazione di Ribosomal Protein S3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RPS3 critici per la funzione di Ribosomal Protein S3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RPS3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ribosomal Protein S3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ribosomal Protein S3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RPS3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ribosomal Protein S3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ribosomal Protein S3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RPS3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RPS3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.