RHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402431

概要

ヒトのHMMRは、RHAMM（receptor for hyaluronan-mediated motility：ヒアルロン酸媒介性運動受容体）をコードする。RHAMMはヒアルロン酸結合タンパク質であり、細胞表面および細胞質内で機能して、細胞の運動性、極性、ならびに有糸分裂紡錘体の構築を協調的に制御する。RHAMMは細胞外マトリックスからのシグナルを細胞骨格リモデリングと統合し、増殖や遊走に影響するMAPK/ERKなどのシグナル伝達ネットワークとも交差する。微小管や中心体関連構造への局在が制御されることにより、RHAMMは細胞周期の進行、紡錘体形成、ゲノム安定性と結び付けられている。HMMR/RHAMMの発現異常やヒアルロン酸シグナルの変調は、浸潤・転移の亢進を含む腫瘍性表現型と関連しており、がん研究および細胞遊走研究における機序的標的としての有用性を支持している。

RHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHMMR遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HMMR内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HMMRのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RHAMMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RHAMMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HMMR欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RHAMMの機能に不可欠なHMMRエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HMMRゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HMMR遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RHAMM HDRプラスミド（h）および RHAMM HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHMMRホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHMMR標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。