RFX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406040

概要

RFX2（regulatory factor X2）は、X-boxモチーフに結合するウィングドヘリックス型の転写因子であり、繊毛形成（ciliogenesis）および運動性繊毛の機能に必要な遺伝子発現プログラムを統合的に制御します。ヒト細胞では、RFX2は基底小体のドッキング、軸糸（axoneme）の組み立て、繊毛内輸送（intrafilagellar transport）を制御するネットワークを調節し、細胞周期と繊毛形成の連関や上皮分化とも結び付けられています。RFXファミリーの転写回路の制御異常は、繊毛関連の発生異常や、運動性繊毛および鞭毛の生合成障害と整合する生殖表現型と関連することが報告されています。複数の繊毛構造遺伝子および輸送遺伝子の上流に位置する転写制御因子として、RFX2は、粘液線毛クリアランス、左右軸（left-right）パターニング、ならびに精子形成に関わる遺伝子発現を制御する経路の研究で頻繁に取り上げられます。

RFX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRFX2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RFX2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RFX2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RFX2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RFX2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RFX2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RFX2の機能に不可欠なRFX2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RFX2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RFX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRFX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RFX2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RFX2 HDRプラスミド（h）および RFX2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRFX2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRFX2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。