REPS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422650

概要

Reps1（REPS1）は、クラスリン介在性エンドサイトーシスや低分子量GTPaseシグナル伝達に関与するタンパク質との相互作用を通じて、受容体の内在化および膜輸送に関わるエンドサイトーシスアダプターをコードします。REPS1は、活性化した細胞表面受容体のリサイクリングやダウンレギュレーションを制御することでシグナルの空間的制御に寄与し、増殖、接着、細胞骨格ダイナミクスを形作る経路に影響を与えます。マウス系では、Reps1の改変を用いて、エンドサイトーシス輸送が免疫系および上皮系の文脈における増殖因子シグナルやインテグリン依存性シグナル伝達ネットワークとどのように連関するかを解析します。受容体輸送の破綻やシグナル減衰の異常は、細胞移動の変化や異常なシグナル伝達など、疾患関連機序と広く関係しており、Reps1は機序解明研究に有用なノードとなります。

REPS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるReps1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Reps1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Reps1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、REPS1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、REPS1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Reps1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• REPS1の機能に不可欠なReps1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Reps1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• REPS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびREPS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Reps1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  REPS1 HDRプラスミド（m）および REPS1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはReps1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のReps1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。