RASAL1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422603

概要

Rasal1 は、活性型 Ras-GTP を不活性型 Ras-GDP へと変換する反応を促進し、Ras 駆動性シグナル伝達を抑制する Ras GTPase 活性化タンパク質である RASAL1 をコードする。下流の RAF–MEK–ERK および PI3K–AKT 経路の活性を調節することで、RASAL1 は細胞増殖・生存・分化プログラムに影響を与え、上皮性／間葉性表現型にも文脈依存的な作用を及ぼす。RASAL1 の機能や発現の変化は、複数組織における増殖制御の破綻や線維化リモデリングと関連づけられており、マウスモデルにおけるシグナル恒常性や疾患関連の細胞リプログラミングの研究における重要性を示している。これらの特性により、Rasal1 は Ras 経路のフィードバックや、転写制御ネットワークおよび細胞外マトリックス制御ネットワークとのクロストークを解析するための有用な結節点となる。

RASAL1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRasal1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rasal1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rasal1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RASAL1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RASAL1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rasal1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RASAL1の機能に不可欠なRasal1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rasal1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RASAL1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRASAL1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rasal1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RASAL1 HDRプラスミド（m）および RASAL1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRasal1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRasal1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。