QPCT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405768

概要

QPCT（グルタミニルペプチド・シクロトランスフェラーゼ）は、分泌されるとともにゴルジ体に局在する酵素で、タンパク質やペプチドのN末端にピログルタミン酸（pyroglutamate）を形成する反応を触媒します。この翻訳後修飾は、プロテアーゼ分解に対する安定性、受容体との相互作用、ペプチドの生物活性に影響し得ます。QPCTはN末端のグルタミンまたはグルタミン酸残基をピログルタミン酸へ変換することで、分泌経路におけるタンパク質成熟に寄与し、細胞外のシグナル伝達環境を調節します。この活性は、ペプチドホルモンや神経ペプチドのプロセシング、細胞外プロテオスタシス、調節性分泌を司る経路と交差します。ピログルタミル化の変化は、タンパク質凝集や神経変性に関連するペプチド修飾と結び付けて報告されており、疾患関連のプロテオフォーム生物学を検討するための機構的ハブとしてQPCTが位置付けられることを示しています。

QPCT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるQPCT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、QPCT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、QPCTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、QPCTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、QPCTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、QPCT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• QPCTの機能に不可欠なQPCTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、QPCTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• QPCT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびQPCT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、QPCT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  QPCT HDRプラスミド（h）および QPCT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはQPCTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のQPCT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。