PSM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401947

概要

FOLH1 は、前立腺特異的膜抗原（PSM）をコードしており、PSM は II 型膜貫通型の金属ペプチダーゼです。PSM には葉酸加水分解酵素活性および NAALADase 活性があり、細胞外グルタミン酸の利用可能性と葉酸代謝を調節します。PSM は、ポリグルタミン酸化葉酸や神経ペプチドのペプチダーゼ依存的なプロセシングに関与し、細胞表面でのアミノ酸シグナル伝達や栄養素の取り扱いに影響を与えます。ヒトでは、FOLH1 発現は前立腺生物学における分子マーカーとして広く用いられているほか、腫瘍関連の新生血管でも検出されるため、がん細胞シグナル伝達、微小環境との相互作用、系譜特異的な制御の研究において重要です。PSM の活性や発現の変化は、疾患に関連した代謝変化や受容体介在性トラフィッキングの変調と関連づけられており、腫瘍学および神経生物学モデルでの機序解明研究を後押ししています。

PSM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFOLH1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FOLH1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FOLH1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PSMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PSMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FOLH1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PSMの機能に不可欠なFOLH1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FOLH1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PSM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPSM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FOLH1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PSM HDRプラスミド（h）および PSM HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFOLH1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFOLH1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。