PSGL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422874

概要

Selplg は、P-セレクチン糖タンパク質リガンド-1（PSGL-1）をコードしています。PSGL-1 は白血球に発現するムチン様シアロムチンで、セレクチンに結合することで、活性化した内皮や血小板上でのテザリング、ローリング、強固な接着を仲介します。糖鎖修飾（グリコシル化）およびチロシン硫酸化が制御されることで、PSGL-1 は接着とケモカイン駆動性シグナル伝達と連携し、白血球のトラフィッキング、血管外遊走、免疫シナプス形成を協調的に制御します。PSGL-1 は好中球の動員、単球—内皮相互作用、血小板—白血球凝集体の形成を調節することで炎症カスケードに関与し、血管炎症と免疫活性化を結び付けます。SELPLG/PSGL-1 の機能異常は宿主防御の変化や炎症性病態と関連することが報告されており、白血球移動や免疫血栓症関連プロセスの機序研究に有用な標的となります。

PSGL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSelplg遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Selplg内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Selplgのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PSGL-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PSGL-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Selplg欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PSGL-1の機能に不可欠なSelplgエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Selplgゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PSGL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPSGL-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Selplg遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PSGL-1 HDRプラスミド（m）および PSGL-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSelplgホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSelplg標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。