Polycystin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400669

概要

PKD2は、TRPファミリーに属するCa2+透過性の非選択性カチオンチャネルであるポリシスチン-2をコードしており、一次繊毛、小胞体、細胞膜に局在して、機械感受性シグナルと細胞内カルシウムシグナル伝達の協調に関与します。ポリシスチン-2はポリシスチン-1と機能的複合体を形成し、Ca2+に連動するエフェクターを介して、上皮の極性、尿細管形態形成、細胞周期制御を調節する繊毛依存性経路に寄与します。PKD2の破綻はカルシウム恒常性を乱し、腎臓を含む各種上皮における増殖・分化・液体輸送に影響する下流のシグナル伝達プログラムを攪乱します。PKD2の遺伝学的変化は常染色体優性多発性嚢胞腎（ADPKD）と強く関連しており、ヒト細胞モデルにおける繊毛シグナル伝達や嚢胞形成関連機構を検証するうえで重要な結節点となります。

Polycystin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPKD2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PKD2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PKD2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Polycystin-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Polycystin-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PKD2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Polycystin-2の機能に不可欠なPKD2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PKD2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Polycystin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPolycystin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PKD2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Polycystin-2 HDRプラスミド（h）および Polycystin-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPKD2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPKD2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。