Podocalyxin-like 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400317-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Podocalyxin-like 1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Podocalyxin-like 1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Podocalyxin-like 1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PODXL. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Podocalyxin-like 1 Anticorpo (4F10): sc-23903
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Podocalyxin-like 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400317-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Podocalyxin-like 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400317-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PODXL codifica a podocalixina-like 1, uma sialomucina altamente glicosilada localizada na superfície apical de células epiteliais e em estruturas especializadas, como os processos podais dos podócitos. Por meio de interações com proteínas ERM e com proteínas de ancoragem (scaffolds), incluindo a NHERF, a PODXL conecta a membrana plasmática ao citoesqueleto de actina para regular a polaridade, a adesão e a motilidade celulares, e pode influenciar a sinalização de GTPases da família Rho e o remodelamento do citoesqueleto. A podocalixina-like 1 contribui para a manutenção das propriedades de barreira e para processos morfogenéticos ao modular interações célula–célula e célula–matriz. Alterações na expressão ou na localização de PODXL têm sido associadas a mudanças na arquitetura tecidual e a fenótipos invasivos em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como marcador e como nó mecanístico em estudos de organização epitelial e do comportamento de células tumorais.
Podocalyxin-like 1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PODXL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PODXL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PODXL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PODXL interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.