Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO PMM2 (h): sc-406428
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PMM2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PMM2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PMM2 Antibody (2A5): sc-517179
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PMM2 (h) | sc-406428 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PMM2 code la phosphomannomutase 2, une enzyme cytosolique qui interconvertit le mannose-6-phosphate et le mannose-1-phosphate afin de soutenir la production de GDP-mannose et la glycosylation N-liée. Par son rôle dans la biosynthèse des précurseurs des glycannes, PMM2 influence le repliement des protéines, le contrôle qualité, la sécrétion et les interactions avec la matrice extracellulaire dans de multiples types cellulaires. Une activité réduite de PMM2 est associée aux troubles congénitaux de la glycosylation, où une maturation défectueuse des glycoprotéines perturbe la signalisation, le trafic intracellulaire et le développement des organes. Dans des modèles cellulaires, la fonction de PMM2 est couramment étudiée pour disséquer les voies de protéostasie et de réponse au stress dépendantes de la glycosylation, notamment l’homéostasie du réticulum endoplasmique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PMM2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PMM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PMM2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PMM2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PMM2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PMM2 pour l'étude de la signalisation de PMM2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PMM2 essentiels à la fonction de PMM2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PMM2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PMM2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PMM2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PMM2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PMM2 plasmide HDR (h) et le PMM2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PMM2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PMM2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.