PITHD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412754

概要

PITHD1は、26Sプロテアソームとの相互作用を介してプロテオスタシスに関与するとされる、小型で保存性の高いタンパク質をコードしており、制御されたタンパク質分解および細胞ストレス適応と関連づけられています。プロテアソーム関連プロセスを調節することで、PITHD1は増殖および生存表現型を規定する短寿命のシグナル伝達因子や細胞周期制御因子の安定性に影響し得ます。PITHD1の発現変動は、複数の腫瘍コンテキストにおけるマルチオミクス研究で報告されており、ユビキチン–プロテアソーム系への依存性を解明する研究標的としての有用性を支持しています。そのため、PITHD1の機能解析は、タンパク質品質管理、ストレス応答、ならびにトランスクリプトーム／プロテオームのリモデリングを司る経路にとって重要です。

PITHD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPITHD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PITHD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PITHD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PITHD1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PITHD1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PITHD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PITHD1の機能に不可欠なPITHD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PITHD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PITHD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPITHD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PITHD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PITHD1 HDRプラスミド（h）および PITHD1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPITHD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPITHD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。