Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406226

概要

PEX10はペルオキシン10をコードしており、ペルオキシソーム膜に局在するRINGフィンガー型E3ユビキチンリガーゼです。これはペルオキシソームの生合成およびマトリックスタンパク質の輸入に必須です。PEX10はPEX2およびPEX12とともにペルオキシソームのユビキチン化機構を構成し、輸入受容体PEX5のリサイクリング制御を助けるとともに、超長鎖脂肪酸のβ酸化や活性酸素種（ROS）恒常性など、ペルオキシソームの代謝経路を支えます。PEX10の機能が損なわれるとペルオキシソームの組み立てが障害され、脂質代謝や酸化還元バランスが破綻します。これらは細胞ストレス応答やオルガネラ間クロストークの中核をなす過程です。PEX10の病的バリアントはツェルウェーガー・スペクトラムに属するペルオキシソーム生合成障害と関連しており、オルガネラ機能不全の機序を研究するうえで重要な標的となります。

Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPEX10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PEX10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PEX10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Peroxin 10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Peroxin 10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PEX10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Peroxin 10の機能に不可欠なPEX10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PEX10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Peroxin 10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPeroxin 10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PEX10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Peroxin 10 HDRプラスミド（h）および Peroxin 10 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPEX10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPEX10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。