PEPCK-M/PCK2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400725-ACT
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PEPCK-M/PCK2 CRISPR Activationプラスミド (h)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- PEPCK-M/PCK2 CRISPR Activationプラスミド (h)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- PEPCK-M/PCK2 CRISPR活性化プラスミド（h）およびPEPCK-M/PCK2 CRISPR活性化プラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PCK2転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PEPCK-M/PCK2 抗体 (62-W): sc-130388
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PEPCK-M/PCK2 CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-400725-ACT | 20 µg | $397.00 |
ヒトPCK2は、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（PEPCK）のミトコンドリア型アイソフォーム（PEPCK-M）をコードしており、GTPを用いてオキサロ酢酸をホスホエノールピルビン酸へ変換する糖新生の主要酵素です。ミトコンドリアにおけるアナプレロシス／カタプレロシスを細胞質での炭水化物および脂質の生合成と結び付けることで、PEPCK-MはTCA回路のフラックス、レドックスバランス、ならびに栄養状態に依存した代謝柔軟性の調整に寄与します。PCK2活性は中心炭素代謝と関連し、糖新生、グリセロネオジェネシス、アミノ酸由来炭素の利用などの経路に影響を及ぼし得ます。PCK2発現の変化は、糖恒常性の異常を伴う疾患や腫瘍代謝でみられる代謝リプログラミングと関連付けられており、ミトコンドリアによる生合成プログラム制御を研究するうえで有用な結節点となります。
PEPCK-M/PCK2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PCK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
PEPCK-M/PCK2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PCK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPCK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PEPCK-M/PCK2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPCK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPEPCK-M/PCK2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPCK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPEPCK-M/PCK2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。