Pcdhb3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430065

Panoramica

Pcdhb3 codifica la protocaderina beta 3, un membro della famiglia delle protocaderine a cluster coinvolta nell’adesione cellula‑cellula dipendente dal calcio e nella definizione dell’identità neuronale. Nel sistema nervoso, le protocaderine contribuiscono alla formazione delle sinapsi, alla crescita dei neuriti e ai meccanismi di auto‑evitamento che affinano la connettività dei circuiti neurali. La funzione di Pcdhb3 è collegata ai complessi di adesione di membrana e ai processi a valle di organizzazione del citoscheletro che modellano il patterning dendritico e assonale. La disregolazione dei cluster genici delle protocaderine è stata associata ad alterazioni delle traiettorie di neurosviluppo e a disfunzioni sinaptiche, supportando l’indagine di Pcdhb3 in modelli di assemblaggio dei circuiti e di fenotipi neurologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pcdhb3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pcdhb3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pcdhb3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pcdhb3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pcdhb3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pcdhb3 per lo studio della segnalazione di Pcdhb3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pcdhb3 critici per la funzione di Pcdhb3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pcdhb3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pcdhb3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Pcdhb3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pcdhb3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pcdhb3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Pcdhb3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pcdhb3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pcdhb3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.