Paralemmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422109

概要

Palmは、膜関連リン酸化タンパク質であるパラレミン（paralemmin）をコードしており、ニューロンに豊富に発現します。パラレミンは細胞皮質における脂質アンカー型の足場形成を介して、形質膜ダイナミクス、フィロポディア形成、神経突起伸長を調節します。さらにパラレミンは、細胞骨格リモデリングやシナプス成熟の過程に関与し、神経回路の結合性や活動依存的可塑性を形作ります。マウスでは、Palmの発現は神経突起の発生パターン形成や樹状突起スパインの組織化と関連し、膜輸送、アクチンリモデリング、シナプス構造を制御する経路とのつながりが示されています。パラレミンに関連する膜構築やシナプス構築の破綻は、結合性の変化やスパイン形態の変化が代表的な実験的指標となる神経発達・神経変性の表現型の文脈で研究されています。

Paralemmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPalm遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Palm内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Palmのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Paralemminタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Paralemminシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Palm欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Paralemminの機能に不可欠なPalmエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Palmゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Paralemmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびParalemmin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Palm遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Paralemmin HDRプラスミド（m）および Paralemmin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPalmホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPalm標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。