PAP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403906

概要

PAPOLAは、ポリ(A)ポリメラーゼα（PAP-α）をコードしている。PAP-αは、ポリアデニル化部位での切断後にプレmRNAへポリ(A)テールを付加するmRNA 3′末端処理機構の中核的な触媒成分である。PAP-αはポリ(A)テール長を制御し、さらに切断・ポリアデニル化特異性因子（CPSF）などと連携することで、mRNAの安定性、核外輸送、翻訳効率に影響を与え、結果として全体的な遺伝子発現プログラムを形成する。PAPOLAに依存する選択的ポリアデニル化は転写産物アイソフォームの多様性に寄与し、増殖や分化の過程で転写後制御を再編成しうる。3′末端処理やポリアデニル化パターンの破綻は、がんをはじめとする遺伝子発現制御の異常に関わることが示唆されており、PAP-αはRNA代謝の機構解明研究における有用な標的（ノード）となる。

PAP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPAPOLA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PAPOLA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PAPOLAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAP-αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAP-αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PAPOLA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAP-αの機能に不可欠なPAPOLAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PAPOLAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPAP-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PAPOLA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAP-α HDRプラスミド（h）および PAP-α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPAPOLAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPAPOLA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。