NPY Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401098

Descripción general

El neuropéptido Y (NPY) codifica un neuropéptido secretado de 36 aminoácidos que señaliza a través de receptores Y acoplados a proteínas G para regular la neurotransmisión, la secreción neuroendocrina y el control autonómico del equilibrio energético. La actividad de NPY se acopla a la señalización mediada por Gi/o para modular los niveles de AMPc, el flujo de calcio y vías de quinasas aguas abajo que influyen en la excitabilidad neuronal, la plasticidad sináptica y los circuitos relacionados con el apetito. Más allá del sistema nervioso central, NPY contribuye a las respuestas al estrés, el tono vascular y el comportamiento de las células inmunitarias, vinculándolo con procesos como la inflamación y la homeostasis metabólica. La señalización desregulada de NPY se ha estudiado en contextos que incluyen la obesidad y las enfermedades metabólicas, fenotipos relacionados con la ansiedad y el estrés, y afecciones neurodegenerativas o neuroinflamatorias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NPY (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NPY en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NPY junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NPY tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NPY.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NPY para la investigación de la señalización de NPY, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NPY críticos para la función de NPY
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NPY para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NPY CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NPY CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NPY. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NPY (h) y el plásmido HDR NPY (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NPY para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NPY definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.