Norpeg CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408852

Übersicht

RAI14 kodiert Norpeg, ein zytoskelettassoziiertes Protein, das an der Organisation aktinreicher Strukturen beteiligt ist und Zellmorphologie, Adhäsion und Motilität reguliert. Norpeg wird mit Signalprozessen in Verbindung gebracht, die den Umbau des Zytoskeletts koordinieren, und unterstützt damit Funktionen in der Zellmigration sowie in epithelialen/mesenchymalen Dynamiken. Expressions- und Funktionsstudien haben RAI14 mit Kontexten veränderter Kontrolle des Zellwachstums und der Gewebearchitektur assoziiert, was es für Untersuchungen proliferativer und invasiver Phänotypen relevant macht. Als scaffold-ähnlicher Faktor bietet Norpeg einen nützlichen Ansatzpunkt, um zu analysieren, wie die Organisation des Zytoskeletts mit intrazellulärer Signalübertragung und stressresponsiven Programmen zusammenwirkt.

Das Norpeg CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAI14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAI14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAI14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Norpeg-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAI14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Norpeg-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAI14-Exone abzielen, die für die Norpeg-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAI14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Norpeg CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Norpeg CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAI14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Norpeg HDR-Plasmid (h) und Norpeg HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAI14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAI14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.