NMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421916

概要

マウスのNmt1は、N末端にグリシンをもつタンパク質の共翻訳的および翻訳後のN-ミリストイル化を触媒する主要酵素であるN-ミリストイルトランスフェラーゼ1（NMT1）をコードします。この脂質修飾は、多様な基質における膜結合、タンパク質安定性、シグナル伝達を制御し、その結果、小胞輸送、細胞骨格ダイナミクス、アポトーシス、自然免疫シグナル伝達などの過程に影響を及ぼします。NMT1の活性はSrcファミリーキナーゼや低分子量GTPアーゼにより制御される経路と交差し、細胞増殖やストレス応答を形成します。タンパク質ミリストイル化の破綻は、がん原性シグナル状態や免疫・神経系表現型の変化と関連づけられており、Nmt1は機構解明研究における重要な解析ノードとなります。

NMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNmt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nmt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nmt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NMT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NMT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nmt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NMT1の機能に不可欠なNmt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nmt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nmt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NMT1 HDRプラスミド（m）および NMT1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNmt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNmt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。