NHERF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424152

概要

Slc9a3r1は、PDZドメインを有する足場タンパク質であるNHERF-1（Na⁺/H⁺交換輸送体調節因子1）をコードしており、頂端側皮質において膜受容体、イオン輸送体、シグナル伝達タンパク質を組織化します。NHERF-1は、NHE3などの複合体を細胞骨格アダプター（例：エズリン）と連結し、上皮のイオン輸送、極性、微絨毛構造を協調的に制御するとともに、GPCRおよび受容体型チロシンキナーゼのシグナル伝達動態を調節します。これらの相互作用を介して、エンドサイトーシス、トラフィッキング、ならびに細胞恒常性を形作るホスホイノシチド依存性シグナル伝達経路などの過程に影響を及ぼします。NHERF-1依存的な足場形成の破綻は、上皮機能障害や異常なシグナル状態と関連づけられており、炎症、バリア機能の健全性、腫瘍性経路のリモデリングに関する研究上の重要性が示されています。

NHERF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc9a3r1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc9a3r1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc9a3r1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NHERF-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NHERF-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc9a3r1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NHERF-1の機能に不可欠なSlc9a3r1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc9a3r1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NHERF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNHERF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc9a3r1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NHERF-1 HDRプラスミド（m）および NHERF-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc9a3r1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc9a3r1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。