NG2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400699-ACT

CSPG4は、膜貫通型コンドロイチン硫酸プロテオグリカンであるNG2（HMW-MAAとしても知られる）をコードしており、細胞周囲マトリックスに関連する受容体として細胞の接着・遊走・増殖を制御します。NG2は、インテグリン/FAK、PDGFR、ならびに細胞骨格リモデリングに関わるシグナル伝達ネットワークに参加し、細胞外マトリックスとの相互作用や細胞の可塑性に影響を与えます。神経系ではオリゴデンドロサイト前駆細胞を規定するマーカーであり、髄鞘形成に関連する過程を調節する一方、他の組織では血管周囲細胞や間質細胞の挙動を支えます。CSPG4/NG2の発現異常は、複数の腫瘍環境において浸潤性や微小環境との相互作用の変化と関連づけられており、系譜状態や細胞—マトリックスシグナルを機構的に研究するための有用な標的となっています。

NG2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CSPG4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NG2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CSPG4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCSPG4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NG2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCSPG4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNG2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCSPG4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNG2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。