nephrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400368

概要

NPHS1はネフリン（nephrin）をコードしており、ネフリンは腎糸球体のポドサイト・スリット膜（slit diaphragm）の構造維持とシグナル伝達機能に必須の、膜貫通型の免疫グロブリンスーパーファミリー蛋白質です。ネフリンは、アダプター蛋白質との相互作用や下流のリン酸化依存的経路を介して、細胞間接着（細胞—細胞ジャンクション）の形成・維持やアクチン細胞骨格の制御に関与し、濾過バリアの完全性を保つのに寄与します。NPHS1の破綻はスリット膜構造を損ない、ポドサイトの接着や生存シグナルを変化させ、先天性ネフローゼ症候群を含む蛋白尿性腎疾患の表現型と関連します。そのためNPHS1は、ポドサイト生物学、濾過バリアの動態、ならびにジャンクションシグナル伝達機構を研究する上で重要な標的です。

nephrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNPHS1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NPHS1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NPHS1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、nephrinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、nephrinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NPHS1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• nephrinの機能に不可欠なNPHS1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NPHS1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• nephrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびnephrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NPHS1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  nephrin HDRプラスミド（h）および nephrin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNPHS1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNPHS1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。