myocilin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401843-ACT

ヒトMYOCは、眼組織に豊富に存在する分泌性の細胞外糖タンパク質ミオシリン（myocilin）をコードしており、細胞外マトリックスの組織化、細胞接着、ならびに細胞骨格動態の調節に寄与する。ミオシリンは小胞体の品質管理過程とも関連し、誤折りたたみが生じるとプロテオスタシスやストレスシグナル伝達に影響を与え、分泌やマトリックスリモデリングに変化をもたらしうる。MYOCの発現異常またはタンパク質の取り扱い（フォールディングや分解など）の異常は、房水流出の制御不全や線維柱帯の機能障害と関連づけられており、眼圧恒常性の研究において重要である。これらの機能により、MYOCは細胞外マトリックス経路、小胞輸送、そして眼の細胞生物学を解析するために用いられる細胞ストレス応答の接点に位置づけられる。

myocilin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYOCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

myocilin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYOC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYOC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性myocilinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYOC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmyocilin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYOC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmyocilin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。