MuRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400797

概要

TRIM63は、筋特異的なE3ユビキチンリガーゼであるMuRF1をコードしている。MuRF1はRINGフィンガー型タンパク質で、サルコメア構造に局在し、収縮タンパク質および制御タンパク質のユビキチン依存的な分解回転を促進する。MuRF1はユビキチン–プロテアソーム系の一部として機能し、栄養欠乏、除神経、炎症性刺激に伴う筋原線維の再構築において、オートファジーやストレス応答シグナルと連携して働く。その転写レベルおよび翻訳後レベルでの制御は、FOXOによるアトロジーン（萎縮関連遺伝子）プログラム、インスリン/IGF-1–AKTシグナル、ならびにNF-κB関連の異化（カタボリック）経路と交差している。TRIM63活性の破綻は骨格筋萎縮の表現型や筋恒常性の変化と関連しており、プロテオスタシス、代謝、筋消耗機構の研究における重要な結節点となる。

MuRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRIM63遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRIM63内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRIM63のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MuRF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MuRF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRIM63欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MuRF1の機能に不可欠なTRIM63エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRIM63ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MuRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMuRF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRIM63遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MuRF1 HDRプラスミド（h）および MuRF1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRIM63ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRIM63標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。