MRP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419711

概要

Abcc2はATP結合カセット（ABC）トランスポーターであるMRP2（ABCC2）をコードしており、細胞膜上で機能する排出ポンプとして、内因性代謝産物や外来性化合物（ゼノバイオティクス）のグルタチオン抱合体、グルクロン酸抱合体、硫酸抱合体を細胞外へ輸送します。マウスではMRP2が、ATP加水分解を有機アニオンの輸送に共役させることで、ビリルビン抱合体やその他の第II相代謝産物を含む基質の排出を担い、細胞の解毒機構とレドックス恒常性を支えています。その活性は肝臓および腎臓でのクリアランス経路と連動し、極性上皮における協調的なトラフィッキングと胆管側／頂端膜への局在化を通じてバリア機能にも寄与します。ABCC2/MRP2機能の変化は、モデル系において胆汁うっ滞表現型、高ビリルビン血症に関連する生物学、ならびに多剤耐性機構の文脈で一般的に研究されています。

MRP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAbcc2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Abcc2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Abcc2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MRP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MRP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Abcc2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MRP2の機能に不可欠なAbcc2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Abcc2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MRP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMRP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Abcc2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MRP2 HDRプラスミド（m）および MRP2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAbcc2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAbcc2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。