MO25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419399

Übersicht

Cab39 kodiert das Scaffold-Protein MO25, einen essenziellen Bindungspartner des LKB1-(STK11)-Kinasekomplexes, der AMPK-verwandte Kinasen stabilisiert und allosterisch aktiviert. Über diese Funktion trägt MO25 zu energie-sensitiven Signalwegen, zur Etablierung der Zellpolarität und zur stressabhängigen Regulation des Stoffwechsels über AMPK-gekoppelte Signalwege sowie verwandte Kinasen wie MARK und Mitglieder der SIK-Familie bei. In Mauszellen kann eine Störung von Cab39 Phosphorylierungsnetzwerke verändern, die die Organisation des Zytoskeletts, die epitheliale Polarität und durch LKB1-abhängige Signalgebung koordinierte Wachstumsprogramme beeinflussen. Da eine Fehlregulation der LKB1–AMPK-Achse breit mit Stoffwechselungleichgewichten und Tumorbiologie in Verbindung gebracht wird, wird Cab39 in Modellsystemen häufig als modulierender Knotenpunkt untersucht, der diese Prozesse beeinflusst.

Das MO25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cab39-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cab39-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cab39 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MO25-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cab39-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MO25-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cab39-Exone abzielen, die für die MO25-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cab39-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MO25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MO25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cab39-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MO25 HDR-Plasmid (m) und MO25 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cab39-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cab39-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.