MKP-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406250

Übersicht

Dual-Specificity-Proteinphosphatase 14 (DUSP14), auch bekannt als MKP-6, ist eine zytoplasmatische MAPK-Phosphatase, die Threonin- und Tyrosinreste dephosphoryliert, um die MAPK-Signalübertragung abzuschwächen. Sie moduliert vor allem stress- und zytokinresponsive Signalwege, darunter die JNK- und p38-MAPK-Kaskaden, und prägt dadurch nachgeschaltete transkriptionelle Programme, die Proliferation, Apoptose und Entzündungsreaktionen steuern. Durch ihre Funktion als negativer Rückkopplungsregulator der MAPK-Aktivität trägt DUSP14 dazu bei, Signalstärke und -dauer in immunologischen und epithelialen Kontexten fein abzustimmen. Eine dysregulierte Expression oder Aktivität von DUSP14 wurde mit einer veränderten Signalhomöostase in der Krebsbiologie und in Mechanismen immunvermittelter Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als zentralen Knotenpunkt für signalwegzentrierte Studien unterstützt.

Das MKP-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DUSP14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DUSP14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DUSP14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MKP-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DUSP14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MKP-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DUSP14-Exone abzielen, die für die MKP-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DUSP14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MKP-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MKP-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DUSP14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MKP-6 HDR-Plasmid (h) und MKP-6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DUSP14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DUSP14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.