Mena Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420173
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Mena El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Mena, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Mena Anticuerpo (21): sc-135988
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Mena Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420173 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Enah codifica Mena (enabled mamífero), una proteína reguladora de la actina de la familia Ena/VASP que promueve la elongación de los filamentos y coordina el acoplamiento actina–membrana en lamelipodios, filopodios y sitios de adhesión. Mena integra señales de las GTPasas de la familia Rho, de las vías de adhesión focal mediadas por integrinas y de estímulos de factores de crecimiento para modelar la polaridad celular, la migración y la morfogénesis tisular. En sistemas murinos, la actividad de Enah se examina habitualmente en contextos como el desarrollo neural, la remodelación epitelial y la dinámica del citoesqueleto que sustenta el comportamiento celular invasivo. La remodelación de actina dependiente de Ena/VASP desregulada se asocia ampliamente con programas alterados de motilidad celular relevantes para la biología del cáncer y fenotipos del neurodesarrollo en modelos experimentales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mena (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Enah en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Enah junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Enah tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mena.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Enah para la investigación de la señalización de Mena, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Enah críticos para la función de Mena
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Enah para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Mena CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Mena CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Enah. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mena (m) y el plásmido HDR Mena (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Enah para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Enah definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.