MCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422848

概要

マウスの Ccl8 は、単球走化性タンパク質-2（MCP-2）をコードしており、CCR1、CCR2、CCR5 などのケモカイン受容体を介したシグナル伝達によって白血球のトラフィッキングを調整する CC ケモカインである。MCP-2 は炎症性走化性を形成し、骨髄系細胞の動員を制御するとともに、損傷または感染した組織において自然免疫と獲得免疫の区画間のクロストークに寄与する。Ccl8 の発現は一般に NF-κB 下流やサイトカイン駆動性プログラムによって誘導され、パターン認識および炎症シグナル伝達を細胞移動に結び付ける。MCP-2 活性の破綻（調節異常）は、慢性炎症状態、自己免疫様表現型、腫瘍関連の免疫細胞浸潤に関与することが示唆されており、免疫微小環境の機序解析において重要である。

MCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcl8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccl8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccl8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MCP-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MCP-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccl8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MCP-2の機能に不可欠なCcl8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccl8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMCP-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccl8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MCP-2 HDRプラスミド（m）および MCP-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcl8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcl8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。