L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422872

概要

Sell は L-セレクチン（CD62L）をコードしており、末梢リンパ節アドレシン（PNAd）などの硫酸化・シアル化糖鎖リガンドに結合することで、高内皮細静脈（HEV）上でのリンパ球ホーミングや白血球ローリングを仲介する白血球接着受容体である。マウス免疫細胞では、CD62L のシェディング（切断）と細胞内輸送が、ナイーブ、セントラルメモリー、活性化といった表現型間の移行を協調して制御し、接着ダイナミクスをケモカイン駆動性の移動および免疫監視と結び付けている。SELL のシグナル伝達とエクトドメイン切断は、炎症カスケードや内皮活性化とも交差し、組織損傷や感染時の白血球動員を形作る。L-セレクチン依存的なトラフィッキングの変化は、細胞の局在やプライミングが疾患表現型に影響する自己免疫、慢性炎症、腫瘍免疫のモデルで一般的に研究されている。

L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSell遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sell内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sellのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、L-Selectin/CD62L/SELLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、L-Selectin/CD62L/SELLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sell欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• L-Selectin/CD62L/SELLの機能に不可欠なSellエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sellゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• L-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびL-Selectin/CD62L/SELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sell遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  L-Selectin/CD62L/SELL HDRプラスミド（m）および L-Selectin/CD62L/SELL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSellホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSell標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。