karyopherin β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403099

概要

TNPO1はカリオフェリンβ2（トランスポーチン1）をコードしており、RanGTPによって制御されるインポート受容体として、PY型核局在化シグナルを認識し、核膜孔複合体を介してRNA結合タンパク質やその他のカーゴの選択的な核内移行を仲介します。核-細胞質間輸送を統括することで、カリオフェリンβ2はRNA代謝、ストレス顆粒の動態、転写制御に影響を及ぼし、Ranサイクルや核膜孔輸送装置などの経路とも結びついています。トランスポーチン依存的な輸送の破綻は、タンパク質の誤局在化や凝集、ならびに遺伝子発現プログラムの変化に関連する機序に関与すると示唆されており、疾患関連の細胞状態における輸送異常を研究するための機能的な切り口を提供します。

karyopherin β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTNPO1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TNPO1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TNPO1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、karyopherin β2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、karyopherin β2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TNPO1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• karyopherin β2の機能に不可欠なTNPO1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TNPO1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• karyopherin β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびkaryopherin β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TNPO1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  karyopherin β2 HDRプラスミド（h）および karyopherin β2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTNPO1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTNPO1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。