IRBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403810

概要

RBP3は、視細胞で産生されて分泌される大型の糖タンパク質である介在視細胞間レチノイド結合タンパク質（IRBP）をコードします。IRBPは視細胞間マトリックスに蓄積し、レチノイドに結合します。IRBPは、視細胞と網膜色素上皮（RPE）との間で11-cis型およびall-trans型レチノイドの細胞外輸送と交換を促進することで視覚サイクルの恒常性を維持し、光伝達の回復に寄与するとともに、レチノイド介在性の酸化ストレスからの保護にも関与します。これらの作用を通じて、IRBPはレチノイド代謝、脂質／レチノイドの輸送、および網膜機能に重要な細胞外マトリックス関連プロセスに影響を与えます。RBP3/IRBPの発現や機能の変化は網膜機能障害の表現型と関連づけられており、変性および炎症性眼疾患の機序の文脈で研究されています。

IRBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRBP3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RBP3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RBP3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IRBPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IRBPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RBP3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IRBPの機能に不可欠なRBP3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RBP3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IRBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびIRBP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RBP3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IRBP HDRプラスミド（h）および IRBP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRBP3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRBP3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。