Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IRBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403810
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- IRBP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico IRBP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IRBP Anticuerpo (A-12): sc-376225
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
IRBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403810 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RBP3 codifica la proteína de unión a retinoides del espacio interfotoreceptor (IRBP), una gran glucoproteína secretada producida por los fotorreceptores que se acumula en la matriz interfotoreceptora y se une a retinoides. IRBP mantiene la homeostasis del ciclo visual al facilitar el transporte y el intercambio extracelular de retinoides 11-cis y todo-trans entre los fotorreceptores y el epitelio pigmentario de la retina, contribuyendo a la recuperación de la fototransducción y a la protección frente al estrés oxidativo mediado por retinoides. A través de estas actividades, IRBP influye en el metabolismo de los retinoides, el tráfico de lípidos/retinoides y procesos asociados a la matriz extracelular críticos para la función retiniana. La alteración de la expresión o la función de RBP3/IRBP se ha asociado con fenotipos de disfunción retiniana y se estudia en el contexto de los mecanismos de enfermedades oculares degenerativas e inflamatorias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO IRBP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RBP3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RBP3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RBP3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IRBP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RBP3 para la investigación de la señalización de IRBP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RBP3 críticos para la función de IRBP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RBP3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido IRBP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido IRBP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RBP3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IRBP (h) y el plásmido HDR IRBP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RBP3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RBP3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.