Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO HPS-4 (h): sc-404822
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HPS-4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HPS-4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HPS-4 Antibody (A-6): sc-398070
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HPS-4 (h) | sc-404822 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
HPS4 code HPS-4, un composant essentiel du complexe BLOC-3 (biogenesis of lysosome-related organelles complex-3) impliqué dans la biogenèse des organites apparentés aux lysosomes. BLOC-3 agit comme facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) et régule le trafic membranaire dépendant de Rab32/Rab38. Par ces voies, HPS-4 contribue au tri du cargo et à son acheminement vers les lysosomes et les organites apparentés, influençant la maturation des mélanosomes, la formation des granules denses plaquettaires et l’homéostasie endolysosomale. L’altération de HPS4 est associée au syndrome d’Hermansky–Pudlak de type 4, une maladie caractérisée par des défauts de biogenèse des organites et de transport vésiculaire. HPS4 est donc largement utilisé pour étudier la dynamique endosomale, la maturation des organites et les phénotypes cellulaires liés à un trafic lysosomal altéré.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HPS-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HPS4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HPS4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HPS4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HPS-4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HPS4 pour l'étude de la signalisation de HPS-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de HPS4 essentiels à la fonction de HPS-4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HPS4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HPS-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HPS-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HPS4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HPS-4 plasmide HDR (h) et le HPS-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HPS4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HPS4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.