Hippi CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412438

概要

IFT57は、一次繊毛の組み立てと維持に必要なカーゴの順行性輸送を担う鞭毛内輸送複合体B（IFT-B）の中核構成要素をコードしています。繊毛形成（ciliogenesis）における役割を通じて、IFT57はHedgehog経路をはじめ、発生、細胞周期の進行、組織恒常性を協調させる受容体介在性プロセスなど、繊毛依存性のシグナル伝達経路に寄与します。IFT-B機能の破綻は繊毛病（ciliopathy）に関連する表現型と結び付けられており、骨格・腎・網膜の生物学に影響する疾患にも関与が示唆されていることから、IFT57は繊毛輸送の機構研究に有用な標的です。ヒト細胞では、IFT57の欠失は、繊毛構造の障害がシグナル出力やオルガネラ依存的な輸送をどのように再配線するかを解析するためによく用いられます。

Hippi CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるIFT57遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、IFT57内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、IFT57のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hippiタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hippiシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、IFT57欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hippiの機能に不可欠なIFT57エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、IFT57ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hippi CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHippi CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、IFT57遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hippi HDRプラスミド（h）および Hippi HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIFT57ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIFT57標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。