HepaCAM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406036

Panoramica

HEPACAM codifica HepaCAM, una molecola di adesione cellulare di tipo immunoglobulinico arricchita sulla membrana plasmatica, che sostiene le interazioni cellula–cellula e l’organizzazione dei tessuti epiteliali. HepaCAM contribuisce all’inibizione da contatto, alla modulazione della morfologia cellulare e alla regolazione della dinamica del citoscheletro attraverso reti di segnalazione associate all’adesione che influenzano migrazione e proliferazione. Un’alterata espressione o funzione di HEPACAM è stata collegata a una disregolazione del controllo della crescita e a un comportamento invasivo in diversi contesti tumorali, in linea con un ruolo nel mantenimento di stati cellulari differenziati. Queste proprietà rendono HEPACAM un nodo utile per indagare la segnalazione dipendente dall’adesione, la stabilità delle giunzioni e i fenotipi associati alla plasticità cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HepaCAM (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HEPACAM in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HEPACAM insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HEPACAM a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HepaCAM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HEPACAM per lo studio della segnalazione di HepaCAM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HEPACAM critici per la funzione di HepaCAM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HEPACAM per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HepaCAM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HepaCAM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HEPACAM. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HepaCAM Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HepaCAM (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HEPACAM per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HEPACAM definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.