Plasmide CRISPR/Cas9 KO hemicentin-1 (h): sc-405850

Présentation

HMCN1 code l’hémicentines-1, une grande glycoprotéine de la matrice extracellulaire qui contribue à l’organisation de l’architecture des membranes basales et soutient l’adhésion cellule–matrice dans des tissus soumis à des contraintes mécaniques. L’hémicentines-1 participe à l’assemblage et au remodelage de la matrice extracellulaire, influençant des processus tels que l’intégrité épithéliale, la morphogenèse tissulaire et la dynamique matricielle liée à la cicatrisation. Des altérations ou une dérégulation de HMCN1 ont été associées à des phénotypes du tissu conjonctif et à des atteintes oculaires, et des études génétiques ont relié certains variants à un risque accru de dégénérescence maculaire liée à l’âge, soulignant sa pertinence pour la biologie de la matrice extracellulaire rétinienne. En tant que composant de la MEC, l’hémicentines-1 constitue un point d’entrée utile pour étudier comment l’organisation de la matrice module la migration cellulaire, la mécanotransduction et la fonction barrière.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hemicentin-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HMCN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HMCN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HMCN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hemicentin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HMCN1 pour l'étude de la signalisation de hemicentin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HMCN1 essentiels à la fonction de hemicentin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HMCN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hemicentin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le hemicentin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HMCN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hemicentin-1 plasmide HDR (h) et le hemicentin-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HMCN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HMCN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.