Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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group VI iPLA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424697
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- group VI iPLA2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico group VI iPLA2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: group VI iPLA2 Antibody (D-4): sc-376563
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
group VI iPLA2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424697 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Pla2g6 codifica la iPLA2 del gruppo VI, una fosfolipasi A2 indipendente da Ca2+ che idrolizza i fosfolipidi di membrana liberando lisofosfolipidi e acidi grassi liberi, inclusa l’acido arachidonico. Attraverso il rimodellamento lipidico e la segnalazione, influenza l’omeostasi delle membrane, l’integrità mitocondriale, il traffico vescicolare e le vie a valle degli eicosanoidi e dello stress ossidativo. Nei sistemi murini, l’attività di Pla2g6 è stata associata a fenotipi neurodegenerativi, alla produzione di mediatori lipidici legata all’infiammazione e alla suscettibilità al danno di membrana in tessuti metabolicamente attivi. Queste funzioni rendono Pla2g6 un nodo utile per studiare la regolazione, guidata dai lipidi, delle risposte cellulari allo stress e dei processi rilevanti per la neuroinfiammazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO group VI iPLA2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pla2g6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pla2g6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pla2g6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina group VI iPLA2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pla2g6 per lo studio della segnalazione di group VI iPLA2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pla2g6 critici per la funzione di group VI iPLA2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pla2g6 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal group VI iPLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal group VI iPLA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pla2g6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal group VI iPLA2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR group VI iPLA2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pla2g6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pla2g6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.