Plasmide CRISPR/Cas9 KO granzyme A (bovine): sc-437323

Présentation

La granzyme A (GZMA) est une protéase à sérine de type tryptase, stockée dans les granules des lymphocytes cytotoxiques et libérée lors de la formation de la synapse immunologique afin de favoriser les lésions des cellules cibles et la signalisation inflammatoire. Dans les systèmes bovins, l’activité de GZMA contribue à l’immunité à médiation cellulaire en participant à des programmes protéolytiques susceptibles d’influencer une mort cellulaire indépendante des caspases, des perturbations mitochondriales et des réponses aux dommages des acides nucléiques. Au-delà de la cytotoxicité directe, la granzyme A a été associée à la modulation des réseaux de cytokines et des voies de l’immunité innée qui façonnent le recrutement des leucocytes et les réponses induites par l’antigène. Des fonctions effectrices altérées, dépendantes des granzymes, sont pertinentes pour l’étude de la dysrégulation immunitaire, de l’inflammation chronique et des interactions hôte–pathogène en immunologie vétérinaire et comparée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO granzyme A (bovine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires bovine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine granzyme A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de granzyme A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de granzyme A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le granzyme A plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine) et le granzyme A plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le granzyme A plasmide HDR (bovine) et le granzyme A (bovine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.