GCH-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420509
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GCH-I O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GCH-I, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GCH-I Anticorpo (C-4): sc-271482
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GCH-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420509 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O Gch1 de camundongo codifica a GTP ciclo-hidrolase I (GCH-I), a enzima limitante da via de biossíntese de tetraidrobiopterina (BH4) a partir de GTP. A BH4 é um cofator essencial, redox-ativo, para as hidroxilases de aminoácidos aromáticos envolvidas na produção de catecolaminas e serotonina, e para as sintases de óxido nítrico que regulam a sinalização por óxido nítrico. Ao controlar a disponibilidade de BH4, a GCH-I conecta o metabolismo de pteridinas à homeostase de neurotransmissores, à biologia vascular e à sensibilidade ao estresse oxidativo. Alterações na atividade do eixo GCH-I/BH4 têm sido associadas à desregulação de vias monoaminérgicas e ao acoplamento prejudicado do óxido nítrico em modelos de disfunção neurológica e cardiovascular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GCH-I (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Gch1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Gch1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Gch1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GCH-I.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Gch1 para a investigação da sinalização de GCH-I, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Gch1 críticos para a função GCH-I
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Gch1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GCH-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GCH-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Gch1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GCH-I Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GCH-I (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Gch1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Gch1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.