GAS41 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404113-NIC

YEATS4 は、核内の YEATS ドメイン含有タンパク質である GAS41 をコードしており、クロマチン結合性の転写およびゲノム構造の制御因子として機能する。GAS41 は SRCAP/TIP60 などの複合体との相互作用を介して、クロマチンリモデリングやヒストンアセチル化に関連する過程に関与し、ヌクレオソーム動態、転写制御、ならびに DNA 損傷に伴うクロマチン応答を支える。細胞周期の進行や遺伝子発現プログラムに影響を与えることから、YEATS4/GAS41 は増殖性の表現型や、複数の腫瘍種で報告されているゲノムコピー数変化とも関連づけられている。これらの特性により、YEATS4 はヒト細胞におけるエピジェネティック制御、クロマチン依存的シグナル伝達、がんに関連する転写ネットワークを研究するための有用な標的となる。

GAS41 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における YEATS4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、YEATS4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、YEATS4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、YEATS4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。