G6Pase-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420443

概要

G6pcは、グルコース-6-ホスファターゼα（G6Pase-α）をコードしています。G6Pase-αは小胞体膜に局在する酵素で、グルコース-6-リン酸を加水分解して遊離グルコースと無機リン酸に変換し、糖新生およびグリコーゲン分解の最終段階を触媒します。マウスの肝臓、腎臓、腸上皮において、G6Pase-αは絶食時の血糖恒常性を支えるとともに、グリコーゲン代謝回転、肝臓からのグルコース放出、小胞体局在の糖質代謝を制御する経路と統合的に機能します。G6Pase-α活性の破綻は、グリコーゲン蓄積や代謝調節異常といった表現型に機序的に結び付いており、G6pcはグルコース取り扱いと肝代謝ストレス応答の研究における重要な標的です。G6pcモデルはまた、糖新生プログラムの転写・ホルモン制御や、小胞体膜酵素機能の解明にも用いられます。

G6Pase-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるG6pc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、G6pc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、G6pcのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、G6Pase-αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、G6Pase-αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、G6pc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• G6Pase-αの機能に不可欠なG6pcエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、G6pcゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• G6Pase-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびG6Pase-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、G6pc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  G6Pase-α HDRプラスミド（m）および G6Pase-α HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはG6pcホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のG6pc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。