ferritin light chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400924

概要

FTLはフェリチン軽鎖をコードしており、細胞内の鉄恒常性を維持し、鉄によって引き起こされる酸化ストレスを抑えるために、鉄を隔離してミネラル化するフェリチンヘテロポリマーの中核構成要素です。不安定な（遊離）鉄プールを緩衝することで、FTLは酸化還元バランス、ミトコンドリア機能、ならびにIRP/IRE調節ネットワークを介した鉄応答性シグナル伝達に影響し、鉄の貯蔵を鉄の取り込みと利用に協調させます。フェリチンの組成や発現が変化すると、鉄の利用可能性や脂質過酸化の起こりやすさが変わることで、フェロトーシス感受性や炎症性ストレス応答が乱れる可能性があります。FTLおよびフェリチンの生物学的制御の破綻は、神経変性、貧血に伴う鉄代謝の異常、がんに関連する代謝リモデリングと関連づけられており、FTLは鉄依存的な細胞表現型を研究する上で有用な結節点となります。

ferritin light chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFTL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FTL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FTLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ferritin light chainタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ferritin light chainシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FTL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ferritin light chainの機能に不可欠なFTLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FTLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ferritin light chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびferritin light chain CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FTL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ferritin light chain HDRプラスミド（h）および ferritin light chain HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFTLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFTL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。