FBXO29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433093

概要

Fbxw8 は、F-box タンパク質である FBXO29 をコードしており、SKP1–CUL1–F-box（SCF）型 E3 ユビキチンリガーゼ複合体における基質認識サブユニットとして機能します。FBXO29 は特定のタンパク質をユビキチン化およびプロテアソーム分解へと導きます。シグナル伝達因子や細胞周期制御因子の制御された分解を介して、FBXO29 はタンパク質恒常性、増殖、分化プログラムの制御に寄与します。ユビキチン依存的な品質管理の一環として、SCF 型リガーゼは増殖因子シグナルやストレス応答を形作る経路と連携しているため、Fbxw8 の撹乱は、がんやその他の増殖性／発生性疾患でみられるプロテオスタシス破綻の機構を研究するうえで重要です。そのため、マウス Fbxw8 モデルは、ユビキチンリガーゼの基質ネットワークと、それが細胞表現型に与える影響を明らかにするのに有用です。

FBXO29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFbxw8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fbxw8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fbxw8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FBXO29タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FBXO29シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fbxw8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FBXO29の機能に不可欠なFbxw8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fbxw8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FBXO29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFBXO29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fbxw8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FBXO29 HDRプラスミド（m）および FBXO29 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFbxw8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFbxw8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。